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人骨成型蛋白3(BMP-3) elisa試劑盒的應用場景

  • 發布日期:2024-09-22      瀏覽次數:1107
    •   人骨成型蛋白3(BoneMorphogeneticProtein3,BMP-3)是一種重要的細胞因子,屬于骨成型蛋白家族。BMP-3在骨的發育、修復和重塑過程中起著至關重要的作用。由于BMP-3在骨代謝中的重要性,針對其濃度的測定成為基礎研究與臨床應用的重要手段。酶聯免疫吸附測定(ELISA)是一種常用的定量檢測方法,能夠準確、靈敏地測定樣品中的BMP-3水平。
       

       

        1.微孔板:預先涂覆有抗BMP-3的抗體的96孔板,用于捕獲樣品中的BMP-3。
        2.標準品:已知濃度的BMP-3標準品,通常以凍干粉形式提供,用于建立標準曲線。
        3.稀釋液:用于稀釋樣品和標準品,通常為一種緩沖液,確保反應的穩定性。
        4.酶標記抗體:與BMP-3特異性結合的酶標記二抗,用于增強信號,常用的酶包括辣根過氧化物酶(HRP)。
        5.底物溶液:特異性底物與酶反應后生成顯色產物,通常使用TMB作為底物。
        6.終止液:用來終止反應,常用的酸液(如1N硫酸)可使顯色反應停止。
        7.洗滌液:用于清洗微孔板,去除未結合的成分。
        實驗步驟:
        1.樣品準備:收集血清、組織勻漿或細胞培養上清等樣品,根據試劑盒說明書進行適當稀釋。
        2.加樣:在微孔板的每個孔中加入樣品和標準品,通常每個孔重復操作三次,以確保結果的可信性。然后在適宜的溫度下孵育1-2小時,使BMP-3與捕獲抗體結合。
        3.洗滌:使用洗滌液清洗微孔板,去除未結合的成分,通常洗滌5-6次,確保板的干凈。
        4.添加酶標記抗體:在每個孔中加入酶標記抗體,繼續孵育1小時,使酶標記抗體與BMP-3形成復合體。
        5.再次洗滌:再次使用洗滌液清洗微孔板,以去除未結合的抗體。
        6.添加底物:向每個孔中加入底物溶液,通常孵育15-30分鐘,直到顏色顯著上升。
        7.終止反應:在適當時間后,加入終止液以終止反應,此時孔內的顏色會立刻改變。
        8.測定吸光度:使用酶標儀在450nm波長下測定每個孔的吸光度(OD值),585nm波長下的參考值用于修正干擾。
        應用領域:
        1.基礎研究:BMP-3在骨細胞的增殖和分化、成骨和骨重塑中發揮重要作用,ELISA可用于相關的機制研究。
        2.臨床診斷:BMP-3在一些骨骼疾病(如骨質疏松癥、骨折愈合不良)中可能存在變化,ELISA可以作為輔助診斷工具。
        3.藥物開發:通過評估BMP-3水平變化,研究新藥對骨代謝的影響。
        人骨成型蛋白3(BMP-3) elisa試劑盒注意事項:
        1.樣品處理:對樣品處理要盡快進行,以防止BMP-3降解。建議使用冷凍保存樣品。
        2.實驗環境:ELISA實驗需要在恒溫環境下進行,以避免溫度變化對結果的影響。
        3.質量控制:使用對照組控制實驗的有效性;標準曲線應每次實驗均需建立。
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